Un kit de ensayo de adenosina desaminasa de alta calidad

La adenosina desaminasa (ADA) es una enzima natural que interviene en la respuesta inmunitaria. La función del difosfato de adenosina (ADP) es activar las células y realizar la permeabilización de la membrana y el efecto citotóxico. La adenosina ha sido identificada como uno de los aminoácidos más importantes necesarios para la actividad normal del cerebro humano. Es sintetizado por el hígado y se distribuye en el plasma sanguíneo a través de acciones del sistema inmunológico. El difosfato de adenosina es un portador del material genético antiviral. En Biomedical Expo, el kit de ensayo de actividad de ADA se utilizará en combinación con BioVision Cytokine mencionado anteriormente.

El difosfato de adenosina (ADP) es un portador del factor de crecimiento de los linfocitos T. En BioVision Cytokine, la adenosina desaminasa (ADO) se extrae del riñón disecado y se analiza mediante un ensayo automatizado espectrofotométrico disponible en el mercado. El reactivo fue pretratado con anti-fosfo-dGlucosa (PI) para evitar su reacción con el analito.

La composición del kit de ensayo de actividad AIDA disponible comercialmente incluye dos componentes principales: el reactivo y el equipo de laboratorio. Los reactivos contenidos en el kit de ensayo de actividad Aida incluyen un cóctel de enzimas purificadas (Sigma-FCA). El equipo de laboratorio consta de un escáner de microplacas (montado detrás de un portaobjetos de vidrio), cristalería, libro de resultados de curva estándar y botella de enjuague. Antes de su uso, las muestras del Aida Activity Assay Kit deben lavarse con agua sin cloro. El uso de reactivos y equipos de laboratorio no se limita únicamente a las pruebas de laboratorio.

Para examinar la capacidad del Aida Activity Assay Kit para medir la actividad total de adenosina desaminasa, se realizaron varias sesiones experimentales. La primera sesión consistió en cuatro días de calco manual. Se disolvieron ciento cincuenta microlitros de Aida-GFP en agua del grifo y se mezclaron con solución salina tamponada con fosfato. Después de veinte minutos, las muestras se analizaron en la pantalla de balance de masas de HPLC.

La segunda sesión incluyó dos días adicionales de trazado manual. Las muestras se inyectaron en el casete de curvas durante dos horas como se describe anteriormente. La tercera sesión incluyó tres días adicionales de trazado manual en la misma sala, seguidos de cuatro horas de inyecciones subcutáneas de adenosina desaminasa (ADCA). La muestra de sangre se extrajo después de una hora para su análisis.

Para la prueba de saliva, se mezclaron quinientos microlitros de soluciones estándar de desaminasa y rosa de pH en un punzón no estéril. A los cerdos se les permitió beber una amplia gama de líquidos, desde agua corriente hasta gaseosas dietéticas, según lo desearan. Cuando las soluciones estándar alcanzaron su punto de ebullición, se insertó un gotero con un volumen predeterminado de saliva y se midió la actividad de la adenosina desaminasa.

El último grupo de seis muestras se analizó utilizando un kit de ensayo de fosforimidazolamina a base de saliva disponible comercialmente (Saproflavil; Thermo Instruments). En este conjunto de ensayos, se mezcló una sola gota de reactivo de fosforimidazolamina/ada salival con un volumen de agua del grifo y se añadió el polvo seco a las muestras. Después de treinta minutos, se tomó una segunda muestra de la misma muestra. En este caso, la actividad en la saliva se midió inmediatamente. El kit había sido diseñado específicamente para medir la actividad del ácido en la saliva humana. Como era de esperar, se pudo detectar una cantidad significativa de actividad.

Como era de esperar, ambos analizadores produjeron resultados similares. La naturaleza altamente específica del análisis de tomografía por emisión de positrones salivales (SPECT), junto con la metodología altamente sensible (alta detección de fluidos intraorales) dio como resultado mediciones significativas y de alta precisión consistentes. El personal de laboratorio utilizado para los procedimientos eran todos expertos en la materia. No hubo evidencia de contaminación, ni de ningún tipo de error en el experimento. Los sujetos de prueba dieron su consentimiento informado y el procedimiento siguió las recomendaciones establecidas por la Asociación Americana de Endocrinólogos Clínicos. En general, los resultados obtenidos con el kit de ensayo de adenosina desaminasa mostraron una buena reproducibilidad, lo que fue confirmado por estudios separados de laboratorios clínicos independientes.